IEC-6大鼠小肠隐窝上皮细胞的培养技巧有哪些？_研究动态_微生物菌种查询网-ATCC,菌种,质粒,细胞系

小杨 / 2024-04-26 09:41:35

一、细胞来源描述

大鼠小肠隐窝上皮细胞主要来源于小肠的上皮组织。小肠是消化道的一部分，由十二指肠、空肠和回肠组成。其中，小肠的上皮组织由多种细胞类型组成，包括隐窝上皮细胞、吸收细胞、杯状细胞等。

隐窝上皮细胞是小肠上皮中最常见的细胞类型之一。它们位于小肠黏膜的隐窝区域，形成了许多腺体样的结构，被称为小肠隐窝。隐窝上皮细胞具有分泌黏液和素有保护作用的功能。

注：该细胞表达肠上皮特有抗原。氢化可的松可抑制该细胞的生长。（该细胞体外倍增次数有限，请使用靠前批次于实验）

以下是详细的IEC-6细胞培养技巧，包括操作步骤、培养条件、细胞复苏、传代和冻存等操作步骤：

二、IEC-6细胞的培养基配制

培养基可以使用DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）或RPMI-1640培养基，添加10%胎牛血清（FBS）。

在培养基中加入10ug/ml胰岛素，胰岛素是无血清哺乳动物细胞培养基中的普遍添加物质，在许多细胞活动中发挥重要作用：如促进糖和氨基酸转运，提高合成代谢降低分解代谢，刺激细胞生长等等。

DMEM +10%胎牛血清+1%P/S+10ug/ml胰岛素

注意:

①低温保存的细胞非常脆弱，请将冻存管放入37C的水中解冻，尽快复苏细胞。

②提前室温预热培养基。

1、在无菌区准备好 15ml 离心管和 T-25 培养瓶并分别加入 5ml 完全培养基;

2、将冻存管放入 37C水浴锅中，握住冻存管不停晃动，直到内容物完全融化。然后立即将冻存管从水浴中取出，擦干并喷洒 75%乙醇，移至无菌区;

3、小心地拆卸盖子，不要碰到里面的螺纹，用移液枪轻轻吸出细胞悬液，加入到准备好的15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min;

4、弃上清后，轻弹离心管底部分散细胞沉淀，加入适量完全培养基重悬细胞后转入准备好的 T25 培养瓶 (建议加液量: 5~7ml) ;

5、轻轻摇动培养瓶使细胞均匀分布，如有必要(如使用不透气瓶)，松开阀盖，以便气体交换

6、将培养瓶放入 CO 培养箱中培养

三、细胞培养条件

在37°C的恒温培养箱中培养细胞。

维持细胞的湿度和合适的CO2浓度（通常为5%）。

四、细胞传代

1、细胞未长至 85%时，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8ml 培养液继续培养。

细胞已长满达 85-95%。即可进行传代，具体步骤如下:

（1）弃去培养液，用 PBS 洗涤 1-2 次;

（2）加入 1.0m 胰酶消化液，37C 消化约 10min(消化时间根据不同细胞及所用胰酶有所差异)，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍瓶壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入至少双倍的含 10%血清的完全培养液，终止消化并轻轻吹打细胞.使其变成单细胞悬液;

（3）将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散：加入新鲜培养基重悬细胞，进行传代；如果没有特别说明，建议收到细胞后的第一次传代比例为 1:2。

注：①观察细胞密度最好用(4X 物)观察，以确的断胞密度，观察细胞形态请用(10X 或20X)高倍镜观察。②推荐使用 0.25%胰酶EDTA 消化液。③瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养。④有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重后接种到新瓶内。

五、细胞冻存

当细胞达到合适的传代次数时，可以进行冻存以备将来使用。

使用合适的冻存培养基，含有10%二甲基亚砜（DMSO）和10%胎牛血清。

缓慢添加冻存培养基到细胞培养皿中，使细胞逐渐适应冻存液的浓度。

将细胞悬浮液分装到冻存管中，并在-80°C或液氮罐中冷冻保存。

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