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    大鼠血管内皮细胞的应用!


    一、背景

    大鼠血管内皮细胞分离自小肠组织;小肠位于腹中,上端接幽门与胃相通,下端通过阑门与大肠相连,是食物消化吸收的主要场所。小肠盘曲于腹腔内,上连胃幽门,下接盲肠,分为十二指肠、空肠和回肠三部分。小肠内消化是至关重要的,因为食物经过小肠内胰液、胆汁和小肠液的化学性消化及小肠运动的机械性消化后,基本上完成了消化过程,同时营养物质被小肠粘膜吸收了。

    小肠内柱状细胞和内分泌细胞与绒毛上皮相似,接近绒毛的柱状细胞与吸收细胞相似,绒毛深部的柱状细胞微绒毛少而短,不形成纹状缘。血管内皮细胞除了吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织等,还参与集体免疫活动,包括:①血管收缩及血管舒张,从而控制血压;②凝血(血栓形成及纤维蛋白溶解);③动脉硬化;④血管生成;⑤炎症及肿胀(浮肿);⑥内皮细胞亦控制一些物质,如白血球进出血管。大鼠血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×105cells/瓶;细胞经CD31/vWF免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

    二、应用

    用于α-亚麻酸改善高血压胰岛素抵抗大鼠血管内皮细胞损伤的作用和机制研究:

    高血压是临床上最常见的心血管疾病之一。具有发病率高和致死率高等特点。最近的研究发现,高血压人群大多数都伴有体内代谢的异常,包括高血糖,高胰岛素血,高血脂,肥胖,糖耐量减低等症状。代谢紊乱加重高血压血管病变,促进血管内皮损伤。

    人们认为胰岛素抵抗是高血压代谢失调的基础因素,由此将胰岛素抵抗和高血压联系在了一起。近些年来,大量研究证据表明胰岛素抵抗和高血压互为因果相互影响加重了血管内皮损伤,导致血管结构功能的异常,引起组织和靶器官的损害。因此对高血压降压治疗的同时,改善胰岛素抵抗可以显著保护血管内皮细胞减轻内皮损伤,为高血压病的预防和治疗提供了新的思路。

    α-亚麻酸是一种植物来源的多不饱和脂肪酸,与来其他源于海产品提取物的EPA和DHA一样,均属于ω-3多不饱和脂肪酸的一种。但是与EPA和DHA相比,它又具有价格低廉,可获得性广泛的优势。大量的研究发现膳食中添加α-亚麻酸可以预防和治疗多种心血管疾病。α-亚麻酸具有降低血脂,降低血压,减轻炎症,抗血小板聚集,抑制血栓形成等多种生理作用。内皮细胞对胰岛素的敏感性增强促进了胰岛素诱导的血管舒张功能。HE染色显示,α-亚麻酸的膳食干预可以减轻果糖喂养组造成的平滑肌增生,中膜增厚等动脉血管组织学病理改变。Westernblot检测示:与正常对照组相比,IRS-1蛋白磷酸化水平在果糖喂养组明显升高,α-亚麻酸可以明显降低IRS-1的磷酸化程度。而Akt蛋白磷酸化水平在果糖喂养组较正常对照组明显降低,而α-亚麻酸显著提高了Akt的磷酸化水平。

    结论:α-亚麻酸对高血压胰岛素抵抗大鼠血管内皮依赖的舒张功能具有明显改善作用,还可以增强内皮对胰岛素的敏感性,胰岛素介导的IRS-1/Akt信号转导通路可能参与其中。α-亚麻酸干预后可以降低AngⅡ诱导内皮细胞的MDA的增高,增加SOD、CAT和NO的表达,显著降低AngⅡ诱导的内皮细胞凋亡水平。α-亚麻酸+angII组中p-Akt表达增高,IRS-1蛋白磷酸化水平及caspase3的表达降低。给予p-Akt抑制剂LY294002处理后能够明显减弱α-亚麻酸的抗凋亡作用,细胞凋亡率和下游信号分子caspase3表达升高。结论:α-亚麻酸可以抑制AngⅡ诱导的内皮凋亡,p-Akt及下游caspase3共同参与了这一作用的实现。

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