【成份】
0978
PartA 基础培养基:
MgCl2·6H2O 0.4 g
CaCl2·2H2O 0.1 g
NH4Cl 0.1 g
KH2PO4 0.2 g
KCl 0.5 g
L-cysteine-HCl·2H2O 0.3 g
酵母粉 0.2 g
Na-acetate 0.082 g
Resazurin 0.0005 g
蒸馏水 1.0 L
Part B 微量元素溶液(333×浓缩液):
FeCl2·4H2O 2 g
ZnCl2 0.07 g
MnCl2·4H2O 0.1 g
H3BO3 0.06 g
CoCl2·6H2O 0.19 g
CuCl2·2H2O 0.002 g
NiCl2·6H2O 0.024 g
HCl(0.1mol/L) 1.0 L
Part C 钨酸钠溶液(1000×浓缩液):
NaOH 0.4 g
Na2WO4·2H2O 0.007 g
蒸馏水 1.0 L
Part D 硫化钠溶液(500×浓储夜,0.22μm过滤):
Na2S·9 H2O 0.12 g
蒸馏水 1.0 L
Part E 维生素溶液1(1000×浓储液,0.22um过滤):
4-Aminobenzoic acid 0.04 g
D(+)- Binotin 0.01 g
DL-α-lipoic acid 0.01 g
Calcium-D(+)-pantothenate 0.1 g
Vitamin B6 0.1 g
Folic acid 0.03 g
Nicotinic acid 0.05 g
Vitamin B2 0.05 g
Na2HPO4·12H2O 11.99 g
NaH2PO4·12H2O 2.57 g
蒸馏水 1.0 L
先用500ml蒸馏水溶解Na2HPO4和NaH2PO4配制PB buffer(pH7.1),然后将维生素溶解于PB buffer中,再加蒸馏水至1000ml。瓶子密闭后上空用氮气驱除氧气。
Part F 维生素溶液2(1000×浓储液,0.22um过滤):
Vitamin B1 0.01 g
NaH2PO4·2H2O 3.9 g
蒸馏水 1.0 L
先在1000ml蒸馏水中溶解NaH2PO4以配制PB buffer(pH3.4),pH用H3PO4调节,然后溶解维生素于PB buffer中,瓶子密闭后上空用氮气驱除氧气。
Part G 维生素溶液3(1000×浓储液,0.22um过滤):
VitaminB12 0.05 g
蒸馏水 1.0 L
Part H 碳酸氢钠溶液(33×浓储液,0.22um过滤):
NaHCO3 84 g
蒸馏水 1.0 L
瓶子密闭后上空用氮气驱除氧气并用二氧化碳饱和该溶液。将A、B、C混合,煮沸15分钟,在氮气下分装培养基至厌氧瓶中,瓶子密闭后上空用氮气驱除氧气并121℃ 20分钟灭菌。培养基冷却后,加入D、E、F、G和H。瓶子上空用H2/CO2(80/20,ca.150kPa)驱除氮气。pH≈7.0(55℃)或7.5(25℃)。以10-20%接种量接种,在50-55℃培养5-10天。