人主动脉血管平滑肌细胞复苏与传代及冻存实验步骤！
小杨 / 2024-03-22 09:41:44
细胞简介
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：HA-VSMC
产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2
细胞数量：1x10^6；1x10^6
保存温度：37℃；-198℃
运输方式：常温保温；运输干冰运输
安全等级：1
仅供科研：1类
培养体系：DMEM高糖培养基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%双抗（Hyclone）
培养温度：37℃
二氧化碳浓度：5%
注释：倍增时间35h
用途：细胞系
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）
实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜，水浴锅，离心机
实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清，三抗
实验材料：T25 细胞培养瓶，需复苏的细胞，移液枪，枪头，离心管
实验步骤：
1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入37℃温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。
2、从 37℃水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀。
3、操作离心，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟
4、弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。
5、次日更换一次培养液，继续培养。
6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中。
细胞传代操作说明（贴壁细胞）
实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜 ，离心机
实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗
实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管
实验步骤：
1、细胞于培养箱中，愈合度达到 80%，可进行传代。
2、按 T25 培养瓶计，吸出完全培养基，并 PBS 缓冲液轻冲 3 遍，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消化 2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10 min ，弃上清 收集细胞，铺至 2 个 T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。
3、注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。
细胞传代操作说明（悬浮细胞）
实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜，离心机
实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，三抗
实验材料：T25 细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管
实验步骤：
1、细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。
2、按 T25 培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min 离心 10 min，弃上清收集细胞，铺至 2 个T25 培养瓶中培养，各添加 7ml 完全培养基。
3、注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。
细胞冻存操作说明
实验仪器：超净工作台，CO2 培养箱，倒置显微镜，离心机
实验试剂：DMEM 培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗 ，DMSO
实验材料：T25 细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头，离心管，冻存管，记号笔
实验步骤：
1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。
2、加入 1ml 冻存液(90%FBS+10%DMSO )制成细胞悬液。
3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。
4、冻存管在 4℃下存放 30 min ，转放-20℃ 1.5～2 h ，再转人-70℃ 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196℃) ，并登记。
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