HKC人肾小管上皮细胞的性质与用途及生产工艺！
小杨 / 2024-03-22 09:02:24
一、知识概述
人肾小管上皮细胞源于正常肾的近曲小管细胞，通过导入HPV-16E6/E7基因而获得永生化。将含有HPV-16E6/E7基因的重组的逆转录病毒载体pLXSN16E6/E7转染外生包装细胞Psi-2，Psi-2细胞产生的病毒再去感染兼嗜性包装细胞系PA317，将PA317产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管pLXSN16E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418筛选转导克隆。Southern和FISH分析显示HK-2细胞来源于单克隆。PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。
二、产品信息
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：HKC
种属：人
年龄（性别）：
组织来源：
生长特性：贴壁
细胞形态：多角形
背景描述：HKC细胞常用于肾小管上皮细胞代谢方面的研究。
生长培养基：DMEM/F12＋5% FBS＋1% P/S
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃
用途：研究
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
三、产品的运输和保存
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
四、产品使用
1)本产品仅能用于科研
2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
3)本产品未通过用于活体诊断的审核
五、细胞接受后的处理方法
1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将 T25 瓶置于 37℃培养约 2-4 h，让细胞适应稳定下新环境。
3）请将培养瓶里的培养液吸取到 2 个 50 ml 离心管中，1000 rpm 离心 5 分钟，收集悬浮的细胞。原瓶中留取 5-10 ml 培养基，用于细胞的继续培养。收集的悬浮细胞可以置于新的细胞培养瓶中继续培养。
4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代时请使用新鲜培养基逐步替代瓶中自带的培养基。培养瓶中留一部分原装培养液，再补加自己新配的培养基至适当容积，例如 4-10 ml，让细胞逐步适应新的培养基环境。
5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。如果细胞发生污染，或者细胞无法传代成功，请务必在7日内给予反馈！
六、细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有 1 ml 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4 mL 培养基混合均匀。在 1000 RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10 cm 皿中，加入约 8 ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2、加 1ml 消化液（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3、按 6-8 ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000 RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加 1-2 mL 培养液后吹匀。
4、将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8 ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1 ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2、4 min 1000 rpm 离心去掉上清。加 1 ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1 ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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