气单胞菌属的生物学特性与微生物学检验!
小杨 / 2022-07-14 09:22:12


气单胞菌属是气单胞菌科下一属,需氧或兼性厌氧。最适生长温度30℃,但在0~45℃皆可生长。营养要求不高,在普通营养琼脂培养基上35℃经24~48h形成1~3mm大小,微白色半透明的菌落。

一、菌种简介
气单胞菌属属于气单胞菌科,广泛分布于自然界,可从水源、土壤以及人的粪便中分离。本属细菌有的种可引起人类和动物肠炎、败血症等多种疾病。

二、生物学特性
1、形态染色
革兰阴性短杆菌,大小为(1~4)μm×(0.1~1)/μm,菌体两端钝圆,单极鞭毛,运动极为活泼(除杀鲑气单胞菌外)。无芽胞,有窄的荚膜。
2、培养特性
在血琼脂上形成灰白、光滑、湿润、凸起直径约2mm的菌落,多数菌株有β溶血环,3~5天后菌落呈暗绿色;在肠道选择培养基上,大多数菌株形成乳糖不发酵菌落;在TCBS琼脂上生长不良;液体培养基中呈均匀混浊。
3、生化反应
发酵葡萄糖产酸,氧化酶和触酶试验阳性,在65g/L NaCl中不生长。

三、微生物学检验
(1)标本采集:根据不同疾病采集粪便或肛拭子、血液、脓汁、脑脊液、尿液等标本。
(2)检验方法及鉴定:
1)直接涂片:标本涂片革兰染色镜检,呈革兰阴性短杆菌。悬滴标本观察动力,运动活泼。
2)分离培养:血液标本经肉浸液或胰化酪蛋白大豆肉汤内增菌后转种血琼脂平板或含氨苄青霉素血平板;脓汁、分泌物等直接接种血琼脂平板;粪便标本接种肠道选择培养基。另一部分标本可接种于PBS,置4℃冷增菌后,于1、3、5、7、17天移种分离平板上。标本接种后,经37℃培养24~48h后可观察菌落特征。
3)鉴定:①初步鉴定:挑可疑菌落移种KIA、MIU做初步生化反应,KIA:K/A、产气+/-、H2S-,MIU:++-;氧化酶阳性;②最后鉴定:氧化酶试验阳性可与肠杆菌科细菌鉴别,发酵葡萄糖可与非发酵菌鉴别。

四、实验内容
1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 
2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 
3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 
4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

五、保存方法
1、传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。
2、液体石蜡覆盖保存法:该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
3、悬液保存法:
①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。
4、载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。
5、常用的冷冻保存法:
①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。
③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。

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