一、产品信息
平台编号：Bio-73294
规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶
细胞信息：HFOB 1.19
细胞名称：人SV40转染成骨细胞
种属：人
年龄（性别）：胎儿 组织来源 骨；成骨细胞；以SV40巨细胞抗原转染
生长特性：贴壁
细胞形态：多细胞形态
背景描述：hFOB 1.19细胞是在0.6mg/mL新霉素G418存在下，用温度敏感的表达载体pUCSVisA58转染自然流产的胎儿四肢组织建立的细胞系。在许可温度33.5℃下细胞分裂很快，而在限制温度39.5℃下细胞极少分裂或不分裂。hFOB 1.19细胞具有分化为表达造骨细胞表型的成熟造骨细胞的能力；hFOB 1.19细胞提供了一个同质化的快速增殖模型系统，用于研究正常人造骨细胞的分化、造骨细胞生理和激素、生长因子和对造骨细胞的功能及分化有影响的细胞因子。
生长培养基：DMEM/F12＋0.3mg/ml G418＋10% FBS＋1% P/S
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：34℃
用途：(STR鉴定正确)
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、细胞的培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
①弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
②加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
③轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
④按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
三、细胞的处理方法
1、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100×，200×各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行售后的依据。
2、收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费重发一次细胞。
3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素的影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后是需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后与客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4、如客户对细胞的种类、纯度、活性等特性有疑问，需提供相应的生物学实验检测结果作为依据。
四、hFOB1.19SV40转染人成骨细胞的传代操作步骤
贴壁细胞传代：
1、提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
2、吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞。
3、加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用。
4、hFOB1.19SV40转染人成骨细胞用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡。
5、将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
悬浮细胞传代：
1、将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min。
2、弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液。
3、将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。
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