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    IMR-90人胚肺成纤维细胞的培养步骤!


    一、基本信息
    平台编号:bio-114905
    规格:1*10 6
    拉丁属名:IMR-90人胚肺成纤维细胞
    细胞名称:人胚肺成纤维细胞
    注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用

    二、细胞介绍
    人胚肺细胞,该细胞株的分裂潜能、病毒易感性等特性已得到深入研究,可作为WI-38和其他标准人肺细胞株的替代品。据报道,这些细胞能够在衰老开始前达到58代的传代水平。

    三、细胞特性
    1)来源:人,肺 
    2)形态:成纤维状 贴壁生长
    3)含量:>1x106  细胞数
    4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
    5) 用途:仅供科研使用。

    四、细胞的运输和保存
    干冰运输及复苏好存活细胞
    (1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
    (2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

    五、细胞接收后的处理方法
    1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
    2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
    3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
    4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。

    六、细胞培养步骤
    1、培养基及培养冻存条件准备:
    1)准备MEM 基础培养基;优质胎牛血清,20%; 双抗,1%。
    2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
    3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
    2、细胞处理:
    1)冻存细胞的复苏:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
    2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
    3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

    对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
    1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 
    3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

    下面T25瓶为例;
    1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
    2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
    3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

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