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    开菲尔乳杆菌的培养与保存方法!


    一、菌株简介
    菌种名称:开菲尔乳杆菌
    使用范围:仅供科研使用
    拉丁属名:Lactobacillus kefir
    中文名称:开菲尔乳杆菌
    属名:Lactobacillus
    种名加词:kefir
    来源历史:←东北农业大学(1.0312)←乳品科学教育部重点实验室分离
    收藏时间:2006.3.31
    原始编号:Kmh3
    资源归类编码:15131319101
    模式菌株:非模式菌株
    主要用途:研究;生产
    具体用途:生产开菲尔乳。
    特征特性:菌落乳白色,中等大小,边缘大多不整齐,长杆和中长杆;异型发酵,都能利用葡萄糖,果糖,不从半乳糖、甘露醇、山梨醇产酸。 
    生物危害程度:四类
    致病对象:无
    分离基物:开菲尔粒
    采集地:内蒙古自治区
    培养基:酪蛋白胨 10.0g,牛肉膏 10.0g,酵母粉 5.0g,葡萄糖 5.0g,乙酸钠 5.0g,柠檬酸二铵 2.0g,Tween 80 1.0g,K2HPO4 2.0g,MgSO4.7H2O 0.2g,MnSO4.H2O 0.05g,CaCO3 20.0g,琼脂 15.0g,蒸馏水 1.0L,pH6.8。
    培养温度:37℃
    资源保藏类型:培养物
    保存方法:真空冷冻干燥法
    实物状态:有实物
    共享方式:公益性共享;资源纯交易性共享;合作研究共享;资源交换性共享
    提供形式:冻干物
    源数据主键:20260
    用途:研究;生产;生产开菲尔乳。
    注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用

    二、菌种的培养
    1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
    2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
    3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。
    4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。
    5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
    6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。

    三、实验内容
    1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 
    2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 
    3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 
    4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

    四、菌种保存方法
    1、传代保存法:培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。
    2、液体石蜡覆盖保存法:该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
    3、悬液保存法
    ① 蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
    ② 糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。
    4、载体保存法:①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。
    5、常用的冷冻保存法
    ① 低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。
    ② 干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。
    ③ 液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。

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