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    短刺小克银汉霉的实验内容与使用方法!


                                                              

    短刺小克银汉霉,属霜霉目,白锈科,拉丁名为Cunninghamella blakesleeana。短刺小克银汉霉,细胞圆球状,在直角两个平面交替分裂形成四联状,一般细胞成对生,单生者罕见,不成链状排列。革兰氏阳性,不运动,兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小,呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。接触酶阴性,不产细胞色素。功用:产酸,调节胃肠道菌群,维持肠道微生态平衡。在动物体内对病原微生物有颉颃作用,可竞争性地抑制病原微生物,增强动物机体的免疫功能,产生有益的代谢产物,激活酸性蛋白酶的活性,参与机体的新陈代谢,防止有害物质产生。

    一、菌种简介
    平台编号:bio-11010
    规格:冻干物
    拉丁属名:Cunninghamella blakesleana
    中文译名:短刺小克银汉霉
    拉丁学名:Cunninghamella blakesleana
    原始编号:大连M135
    菌株来源:←东北科学研究所大连分所
    直接来源国家:中国
    保藏时间:11/12/1953
    其他保藏编号 
    生物危害:四类
    模式菌株:非模式菌株
    菌株用途:研究
    培养温度:25-28℃
    培养基:0014    
    提供形式:冻干物
    注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
    储存条件:冻干菌种和试管斜面请置于 6-10℃冷藏。

    二、培养条件
    PDA 培养基
    马铃薯浸取液 1.0 L 葡萄糖 20.0g 琼脂 15.0g PH 7.0
    [注]马铃薯浸取液配制方法:马铃薯洗净去皮,取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 30分钟后滤去马铃薯块,将滤液补足 1000ml。 

    三、菌种的使用与注意
    1、使用方法:
    直接加入配合饲料中或先按一定倍数稀释后,再加入饲料中混匀。也可预先活化后再发酵饲料或直接供动物饮用。具体用量参考产品使用说明。
    2、注意事项:
    储存时,提高水分含量则菌群活力明显下降。高温制粒时,必须对产品进行包被处理。不饱和脂肪酸对乳酸片球菌具有颉颃作用,配合日粮中添加乳酸片球菌,应尽量避免与添加的油脂直接接触。饲料中的钙也会明显影响乳酸片球菌的活性。

    四、实验内容
    1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 
    2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 
    3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 
    4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

    五、注意事项
    1、菌种常规培养时间:细菌 1-2 天,酵母 3 天,霉菌 5-7 天,大型真菌 7-10 天。
    2、菌种恢复培养前,建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下,某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态,延迟期较长,如在说明建议的培养时间还未长起来,请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间,直至菌种培养完成,有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长,一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。
    3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养,如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失,我单位不负责任。
    4、恢复培养厌氧菌时,在操作过程中应严格控制厌氧条件:制作培养基时,应使用厌氧螺口试管,并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气,使用者应保证菌种的安全存储和操作,带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。
    5、与菌种相关的其它信息请参阅中国微生物菌种查询网网站(www.biobw.org)。

    六、冻干管打管说明书
    1、安瓿瓶开封:用浸过 75%酒精的脱脂棉擦净安瓿管,用火焰加热其顶端,滴少量(2-3滴)无菌水至加热顶端使之破裂(应避免过多水蒸气影响菌种的复苏),用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
    2、用无菌吸管吸取 0.3ml(建议勿超过 0.5ml)适宜的液体培养基(不添加琼脂),滴入管内,轻轻振荡,待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状,在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中(不超过 2 支,中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂,请务必做成试管斜面配方中没有琼脂试管中液体培养基不超过 5ml),并在建议的条件下静止培养。
    3、冻干管打开后需一次用完,不能留存。另外,安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂,里面菌体为少数,复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上,否则可能造成复苏不成功。
    4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行,生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作,打管时冻干管应远离面部,保护眼睛。
    5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行,用完冻干管应灭菌处理后丢弃。
    6、菌种复苏时,请务必记录好菌种的编号和制备批号,否则不予售后。

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