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    昆虫细胞的分布与发展过程及处理方法!


    昆虫细胞是农业生物应用方面的高新技术,主要是提取来自昆虫的一类真核细胞。通过培养制造宿主的病毒,这些病毒可以引起昆虫流行病,但对人畜和植物无害,因而可作病毒杀虫剂。还可以生产某些药用蛋白。

    一、产品信息
    平台编号:bio-81779
    规格:1×10?cells/T25培养瓶
    拉丁属名:Hi-five(BTI-TN-5B1-4)
    细胞名称:Hi-five(BTI-TN-5B1-4)(昆虫细胞) 
    种属:粉纹夜蛾 年龄(性别) 
    生长特性:贴壁/悬浮
    细胞形态:淋巴母细胞样
    背景描述:Hi-five(BTI-TN-5B1-4)细胞是由武汉大学生命科学学院胡远扬教授提交保藏。Hi-five(BTI-TN-5B1-4)细胞是一株昆虫细胞,主要用于昆虫病毒的扩增、病毒与宿主细胞相互作用的研究等。
    生长培养基:TNM-FH(货号:152010)+10% FBS(货号:164210-500)+1% P/S(货号:180120) 
    培养条件 
    气相:空气,100% 
    温度:27℃
    注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用

    二、细胞简介
    昆虫细胞是来自昆虫的一类真核细胞。昆虫细胞的体外培养日益受到人们的重视。其原因有两个方面:第一,作为宿主表达高度特异性的病毒,这些病毒可以引起昆虫流行病,但对人畜和植物无害,因而可作病毒杀虫剂。第二,昆虫多角体病毒可以高水平表达蛋白,其基因片段可以用来构建重组病毒以高效表达外源基因,生产某些药用蛋白。因此昆虫细胞的体外培养正逐渐成为生产用于农业和人类健康保健用的生物产品的重要手段。

    三、发展过程
    最早进行昆虫组织体外培养的是Richard Goldschmidt,他在1915使用惜比古天蚕蛾hyalophora cecropia的精子进行体外培养,用来观察精子的发育。他成功维持了惜比古天蚕蛾外植体,并在体外保持了天蚕蛾的精子活性,但未见到细胞分裂,当时他没有适合的培养基用于昆虫细胞培养。Trager首次研究了培养基中昆虫细胞的生长条件,目的是证明单个细胞能在体外存活几天,并利用昆虫细胞培养基研究昆虫和哺乳动物病毒。1956年,Silver Wyatt改进了用于家蚕蛹的培养基,成功的使卵巢细胞存活了14d,仍然没能传代。1957年,我国高尚荫教师使用Trager的培养基,并补加10%非灭活的血淋巴液,成功的将家蚕卵巢细胞培养了至少22代,建立了第一个家蚕细胞系。同年Grace对Wyatt的培养基进行了改进,增加了胆固醇、内分泌腺和卵巢组织的提取物以及含有10种B族维生素的混合物,使4龄家蚕幼虫的卵巢细胞存活了29d。直到1962年,Grace才首次建立了四株可持续性的昆虫细胞系-按蚕蛾anteraea eucalypti 卵巢细胞系。从此,昆虫细胞系的建立工作在世界范围内广泛展开,新建立的细胞系不断出现。全世界的学者们已从100多种昆虫中建立了500多株细胞系。在国内,据2004年综述报道有20多个昆虫细胞系建立。

    四、细胞分布
    这些细胞系绝大多数来自于鳞翅目和双翅目的农业害虫,其来源组织包括卵巢、精巢、胚胎、成虫盘、血细胞、中肠、脂肪体等,其中用卵巢组织和胚胎组织建立的细胞系最多,而神经组织、表皮组织、内分泌系统和肌肉组织等的细胞系极少或没有报道。用未成熟或未分化的组织建立细胞系比用成熟组织容易,主要是因为其中干细胞含量高。虽然已建立了很多的昆虫细胞系,但迄今为止,研究和应用的最多的是草地贪叶蛾(Spodoptera Frugiperda)卵巢细胞系Sf21及其克隆株Sf9和粉纹夜蛾(Trichop lusiani)胚胎细胞系BTI-Tn5B1-4(商品名High Five)。

    五、收到常温细胞后的处理方法
    1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与中国微生物菌种查询网的技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。
    2、用 75 酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养 2-4 小时,以便稳定细胞状态。
    3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
    4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。
    5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过 80 ,可正常传代;若未超过 80 ,移除细胞培养瓶内培养基,预留 5ml 左右继续培养,直至细胞密度达 80 左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。
    6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至 50ml 无菌离心管内,1200rpm 离心 5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入 5ml 培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过 80 ,可将细胞悬液分至 2 个细胞培养瓶内培养,补加培养基至 5ml;若细胞密度未超过 80 ,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达 80 左右时再进行传代操作。

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