一、细胞简介
平台编号：bio-54196
提供形式：复苏状态
拉丁属名：CRFK
细胞名称：CRFK（猫肾细胞）
中文名称：猫肾细胞
描述：此细胞不含牛病毒性痢疾(BVD)病毒。
动物种别：猫
性别：雌
组织来源：肾，皮层；正常
形态：上皮细胞
培养基和添加剂：RPMI-1640(GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。
供应限制：仅供研究之用。
REFERENCE：Crandell RA , et al. Development, characterization, and viral susceptibility of a feline (Felis catus) renal cell line (CRFK). In Vitro 9: 176-185, 1973. PubMed: 4130570 Fabricant CG , Rich LJ . Microbial studies of feline urolithiasis. J. Am. Vet. Med. Assoc. 158: 976-980, 1971. PubMed: 4930310 Lee KM , et al. Use of an established cat cell line for investigation and quantitation of feline oncornaviruses. J. Natl. Cancer Inst. 49: 55-60, 1972. PubMed: 4338781 Loffler S , et al. CD9, a tetraspan transmembrane protein, renders cells susceptible to canine distemper virus. J. Virol. 71: 42-49, 1997. PubMed: 8985321
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用
二、背景及概述
CRFK（猫肾细胞）传代建议：1：2~1：3传代，2~3天换液1次，细胞质检情况：不含细菌、真菌、支原体等微生物污染。CRFK/猫肾细胞培养条件RPMI-1640+10%FBS+1%P/S；生长条件为气相：5%CO2、95%空气；温度：37℃；冻存条件为90%FBS+10%DMSO。CRFK/猫肾细胞细胞不含细菌、真菌、支原体等微生物污染。有试验研究对不同毒力水貂阿留申病毒(AMDV)在CRFK/猫肾细胞中的增殖规律及其诱导细胞凋亡情况进行比较研究。将标准毒株AMDV-G及分离到的野毒株AMDVDL124、AMDV-DL125、AMDV-QD2、AMDV-QD3、AMDV-ZJ3接种CRFK/猫肾细胞，应用间接免疫荧光、实时荧光定量PCR、TCID50测定技术研究病毒在细胞中的复制及表达情况，同时检测病毒诱导的细胞凋亡情况。
间接免疫荧光结果显示，5株野毒株荧光着色趋势差异不大，均在感染后12h出现荧光，随感染时间延长荧光增多，AMDV-G荧光出现时间比野毒株晚，但病毒感染后72h几乎所有细胞均出现荧光；实时荧光定量PCR结果显示，基因组复制趋势大致相同，AMDV-DL125感染后3h复制开始，AMDV-G感染后24h复制才开始并呈快速增长趋势，但感染后72h均达到峰值。TCID50检测结果表明，0～12h为病毒感染潜伏期，AMDV-G感染后60h达到峰值，野毒株均在感染后72h达到峰值，但是6株病毒均能在感染后48～72h维持较高的感染滴度，其后随细胞崩解而降低。SPSS23.0统计软件分析凋亡检测结果显示，与对照组相比，野毒株感染细胞后2～12h诱导细胞凋亡差异显著，AMDV-G诱导细胞凋亡差异明显低于野毒株，但是诱导细胞凋亡时间较野毒株长，在感染后24h仍对细胞凋亡有较明显的诱导作用，但是各病毒诱导的细胞凋亡主要集中在2～12h。该结果为AMDV的培养、鉴定及致病机理研究提供一定参考。
三、细胞处理方法
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导，请及时电话或邮件联系。
1、贴壁细胞
⑴客户接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
⑵肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
⑶显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
⑷严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
⑸将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
⑹用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
⑺1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2 培养。
2、悬浮细胞
⑴接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
⑵肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
⑶严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
⑷将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。
⑸1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2 培养
四、CRFK（猫肾细胞）操作说明
1、对于常温运输的细胞，收到细胞后，检查是否有运输问题，即细胞培养瓶或管是否破损，细胞培养液是否溢出。若没有运输问题，请75%酒精消毒后，保留封口膜，放入细胞培养箱中静置。严格检查培养箱的参数：温度，湿度和CO2浓度。细胞静置时间一般为6-12小时后，细胞状态稳定后，即可开始后续操作。选用正确的细胞培养体系，A2780(人卵巢癌细胞)严格按照说明书的培养条件进行培养。条件允许，培养的前三天内做细胞拍照记录，通过邮件发送给我们做及时状态跟踪。
2、对于干冰运输的细胞，请取出冷冻管后，须立即放入37C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。然后将其复苏培养，次日更换培养液。
五、CRFK（猫肾细胞）注意事项
1、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
2、对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度。
3、对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时（即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白），此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。