一、细胞简介
平台编号：bio-73458
规格：冷冻管
拉丁属名：HA-VSMC
细胞名称：HA-VSMC（人主动脉血管平滑肌细胞）
种属：人
年龄（性别）：11月龄
组织来源：主动脉
生长特性：贴壁
细胞形态：成纤维细胞样
细胞用途：仅供科研使用。
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用。
二、细胞特性
1）来源：人；主动脉血管；平滑肌细胞
2）形态：成纤维细胞样；贴壁生长
3）含量：>1x106 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25 瓶
6）培养基：DMEM/F12 90% + FBS 10% + 1% 双抗。
7）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。
8）冻存液：90% 完全培养基，10% DMSO，现用现配，液氮储存。
9）注意事项：拿到细胞后，一定要首先给细胞拍照，严格按照细胞操作说明书进行操作，在刚开始拿到细胞后的 1 周内，每次传代一定要注意拍照。
三、细胞的运输和保存
使用含有优质胎牛血清的 2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在 1000RPM，常温条件下，离心 5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至 10 cm 培养皿或者 T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
四、细胞接受后的处理方法
1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将 T25 瓶置于 37℃培养约 2-4 h，让细胞适应稳定下新环境。
3）请将培养瓶里的培养液吸取到 2 个 50 ml 离心管中，1000 rpm 离心 5 分钟，收集悬浮的细胞。原瓶中留取 5-10 ml 培养基，用于细胞的继续培养。收集的悬浮细胞可以置于新的细胞培养瓶中继续培养。
4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代时请使用新鲜培养基逐步替代瓶中自带的培养基。培养瓶中留一部分原装培养液，再补加自己新配的培养基至适当容积，例如 4-10 ml，让细胞逐步适应新的培养基环境。
5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。如果细胞发生污染，或者细胞无法传代成功，请务必在7日内给予反馈！
五、细胞培养步骤
细胞处理：
1）复苏细胞：将含有 1 ml 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4 mL 培养基混合均匀。在 1000 RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2 mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10 cm 皿中，加入约 8 ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2、加 1ml 消化液（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3、按 6-8 ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000 RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加 1-2 mL 培养液后吹匀。
4、将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8 ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1 ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2、4 min 1000 rpm 离心去掉上清。加 1 ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1 ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
六、注意事项
1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞汇合度 80%左右时正常传代。
5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和Procell 技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7、该细胞仅供科研使用。