3T3-L1 ,小鼠脂肪前体细胞的培养方法
中国微生物菌种查询网 / 2013-05-13 06:13:41

 

细胞系描述


细胞株名称:3T3-L1  ,小鼠脂肪前体细胞

种属:swiss小鼠

组织来源:胚胎

生长特性:贴壁生长

形态特征:成纤维样细胞

染色体:染色体众数为68-72。

支原体和其它微生物:(-)

细胞特征:L1是3T3的克隆亚株。细胞聚集并达到接触抑制的增值过程中,会发生前体脂肪细胞向脂肪细胞的转变。培养液中,高血清含量可以促进脂肪滴堆积。

培养条件:完全培养基:90%DMEM(高糖,2mM  L-glutamine)+10%新生牛血清

ATCC推荐此细胞最好用新生牛血清(质量要好)。如果发现细胞状态不好时,可换胎牛血清调整。

培养温度:37℃,  CO2:5%

传代方法:收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:

如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换  10ml新鲜培养液后继续培养。

如果细胞已长满(达80-90%),即可进行传代培养。具体步骤如下:

1.  弃去培养液,用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。

2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM  EDTA)于培养瓶中,倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热,然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大约10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3.  按6-8ml/瓶补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。如果没有特别说明,收到细胞后的第一次传代一般是一传二。

注:1、观察细胞最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基,细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请及时与我们联系。

冻存方法:冻存液:90%完全培养液,10%DMSO。现用现配。

储  存:液氮。


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