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    小鼠肺上皮细胞的知识简介及应用!


                                                          

    一、产品信息

    平台编号:bio-83959

    规格:1×10?cells/T25培养瓶

    拉丁属名:TC-1

    细胞名称:TC-1(小鼠肺上皮细胞) 

    种属:小鼠 

    组织来源:肺 

    培养条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃

    注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。

    二、背景

    小鼠肺上皮细胞分离自小鼠肺组织,肺泡上皮细胞(AECs)是肺细胞的主要类型之一,可用于分析肺上皮细胞对外界因素的反应。因此,小鼠肺部的AECs可以作为疾病的体外模型。AECs对于研究肺的发育、损伤和修复是必不可少的。从事呼吸系统疾病如急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、囊性纤维化、肺气肿和肺炎研究的人员通常依赖AECs进行研究。

    肺泡上皮细胞有两种类型:I型肺泡上皮细胞(AECI)和II型肺泡上皮细胞(AECII)。

    AECI很薄,是一种细长的鳞状细胞,主要帮助肺泡和血液之间的气体交换。AECII是一种小立方形的细胞,分泌肺表面活性物质以降低肺泡表面张力。由于AECII更丰富(大约占ACEs的60%),它们比AECI更容易分离。因此,大多数人从肺中分离出初生AECII细胞,然后对它们进行分化,以获得AECI样表型。

    体外原代培养的AECⅡ约18h已经贴壁生长。将细胞悬液接种入培养瓶中,置37℃,5%CO2培养箱内孵育45min,此时贴壁的细胞多为成纤维细胞,悬在培养液中的细胞多数为AECⅡ、部分成纤维细胞及其他杂细胞。

    将培养液吸出接种于另一培养瓶中,同样继续37℃孵育40min,连续2~3次,最后吸出培养液,800r/min离心5min,去上清,用含10%胎牛血清的DMEM/F12重悬细胞沉淀,按密度为4x105个细胞/cm2接种于培养瓶中,37℃,5%CO2条件下培养24h后换液,去除未贴壁细胞继续培养3~6d,倒置显微镜观察细胞生长状态和形态特征。

    培养48h细胞状态良好,可进行进一步的后续实验。培养36~48h,细胞平展呈多边形,逐渐融合,相互连接成细胞单层。培养大约72h后,细胞逐渐变得扁平,细胞内颗粒较前减少,有排空现象,胞质颜色变淡。

    培养5~6d后,细胞内充满空泡,无法辨认Ⅱ型细胞形态。

    三、应用

    用于乙酰化修饰JAK2/STAT3对AngⅡ诱导小鼠肺泡上皮细胞间质转分化影响的机制研究:

    研究JAK2/STAT3信号通路对AngⅡ诱导小鼠肺泡上皮细胞间质转分化的影响。

    方法:

    1、复制小鼠肺泡上皮细胞间质转分化模型,依次用浓度为0.1umol/l、lumol/l、10umol/l的AngⅡ干预贴壁生长的MLE-12细胞,48h后收集蛋白,Western blot检测α-SMA表达,明确AngⅡ的最佳干预浓度。

    2、将体外培养MLE-12细胞分为正常对照组、DMSO对照组、AngⅡ刺激组、AngⅡ+AG490组,正常对照组给予10ul PBS,DMSO对照组给予10umol/LDMSO+lumol/LAngⅡ,AngⅡ刺激组给予1 umol/L AngⅡ,AngⅡ+AG490组给予1 Oumol/L AG490+1umol/L AngⅡ,干预30min后收集蛋白,采用Western blot检测信号通路蛋白:JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达水平。

    3、分组干预48h后收集蛋白,检测上皮细胞的标记物E-钙黏素(E-cadherin),间质细胞的标记物平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及促纤维化因子TGF-β的表达,通过上皮向间质转分化的标记物,评估JAK2/STAT3信号通路在参与AngⅡ诱导小鼠肺泡上皮细胞向成纤维细胞转分化过程中的作用。

    4、分组干预48h后,用CCK8法检测不同干预药物对MLE-12细胞活性的影响。

    结果:

    不同浓度AngⅡ对MLE-12细胞表达α-SMA的影响。与空白对照组相比,lumol/1 AngⅡ干预48h后MLE-12细胞表达的α-SMA显著增加(P<0.05)。

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