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    中国仓鼠肺成纤维细胞 百欧博伟生物


    一、产品概述
    平台编号:bio-51556
    拉丁属名:CHL-Don
    细胞株名称:CHL-Don ,中国仓鼠肺细胞
    种属:中国仓鼠
    性别:雌性
    组织来源:肺
    生长特性:贴壁生长
    形态特征:成纤维细胞
    微生物,支原体检测:阴性(-)
    染色体:该细胞的染色体数目在22-27之间。
    培养条件:
    完全培养基: DMEM(内含2mM L-glutamine)+10%胎牛血清(FBS).
    培养条件:37℃ , CO2:5%
    产品用途:仅供科研研究使用。
    注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用。

    二、细胞操作流程

    1、收到CHL中国仓鼠肺细胞后,请按照以下方法进行操作:
    取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
     
    2、细胞传代:
    1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
    2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
    3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,*后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
    4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。

    3、细胞冻存:
    1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
    2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
    3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
    4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

    4、细胞复苏:
    1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
    2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
    3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
    4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。

    三、细胞处理方法

    (一)贴壁细胞
    1、接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。
    2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
    3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。
    4、37度平衡1-2小时。
    5、用移液管吸取培养基,到50ml离心管中,剩下细胞密度达到80%至90%可以传代,如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。
    6、如果肉眼检查上清有细胞,对50ml上清进行离心收集细胞,如果细胞连片状态,弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化(1ml胰酶37度),接种培养。
     
    (二)悬浮细胞
    1、接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。
    2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
    3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。
    4、细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)。
    5、1000rpm,5min 离心,用吸管小心吸出上清,加入培养基,重悬细胞。
    6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种,加入新鲜培养基,置于 37℃,5%CO2 培养(大部分细胞)。

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