COLO205（人结肠癌细胞）的培养与应用！
小杨 / 2020-09-11 09:08:22
COLO205细胞是1957年由T.U.Sample等从患有结肠癌的70岁男性白人的腹水中分离的。该病人在取腹水样品前已用5-氟尿嘧啶治疗4~6周。角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。
一、细胞简介
平台编号：bio-106212
拉丁属名：COLO205（人结肠癌细胞）
细胞名称：人结肠癌细胞
规格：1*10 6
来源：结直肠腺癌，腹水转移
形态：上皮细胞样，半贴壁生长
含量：>1x106 个/mL
污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用
二、COLO205人结肠癌细胞的培养操作
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
⑴弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
⑵加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
⑶按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
⑷将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25瓶为类；
1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2、4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。
三、COLO205人结肠癌细胞的应用
用于shRNA介导PIAS3表达下调对人结肠癌COLO205细胞增殖和凋亡的影响研究：
检测取自人体不同部位、不同Dukes分期的人结肠癌细胞株SW480(取自结肠癌组织,Dukes B期)、SW620(取自结肠癌淋巴转移组织,Dukes C期)及COLO205(取自结肠癌腹腔转移腹水组织,Dukes D期)中PIAS3的表达水平,筛选PIAS3相对高表达细胞株进行shRNA质粒转染干预实验。
通过转染PIAS3shRNA质粒,下调结肠癌细胞株中PIAS3基因的表达水平,研究该基因的差异性表达对结肠癌细胞增殖活性、凋亡和细胞周期的影响。
方法：运用实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)检测SW480、SW620及COLO205三种入结肠癌细胞株中PIAS3基因的表达水平；运用脂质体介导将PIAS3shRNA质粒及无关序列shRNA对照质粒转染入人结肠癌细胞株,干预后区分为：PIAS3shRNA转染组(转染PIAS3shRNA质粒)、无关序列shRNA转染组(转染无关序列对照质粒)及空白对照组(不进行转染干预)。
采用Real-Time PCR.Western blot检测质粒转染干预对PIAS3基因的抑制效果；MTT(噻唑蓝)法检测PIAS3表达下调对结肠癌细胞增殖活性的影响；流式细胞仪检测PIAS3表达下调对人结肠癌细胞周期和凋亡的影响。
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