一、细胞简介
平台编号：bio-73240
拉丁属名：NCI-H460
细胞名称：NCI-H460 [H460]（人大细胞肺癌细胞）
种属：人
年龄（性别）：男
组织来源：肺；转移灶：肋膜渗出癌；大细胞肺癌
生长特性：贴壁
细胞形态：上皮细胞样
背景描述：NCI-H460细胞是从一位大细胞肺癌患者的胸水中建立的。NCI-H460细胞表达的p53 mRNA易于检测，其水平与正常肺细胞相当，未表现出NCI-H460细胞DNA总体结构异常。NCI-H460细胞角蛋白和波形蛋白纤维染色阳性；神经丝三联体蛋白阴性。
生长培养基：RPMI-1640(货号:PM150110)＋10% FBS(货号:164210-500)＋1% P/S(货号:PB180120)
培养条件：气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用
二、细胞介绍
该细胞1982年由A.F. Gazdar建系，源自一位患有大细胞肺癌的男性的胸腔积液。该细胞角蛋白、波形蛋白阳性。
三、细胞特性
1）来源：肺癌
2）形态：上皮细胞样，贴壁生长
3）含量：>1x106 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
四、细胞收到后处理
NCI-H460人大细胞肺癌细胞（STR鉴定）在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液移入废液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml完全培养液，悬浮细胞需离心处理，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。
五、细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心5分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
⑴弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
⑵加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
⑶按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
⑷将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集，1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？
1、细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；
2、冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
3、存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
4、冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
5、视具体情况而定。
北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！