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    ATDC5(小鼠胚胎瘤细胞)的应用!


                                                                

    ATDC5细胞是来源于畸胎瘤细胞的小鼠软骨发生细胞系,在胰岛素刺激下,分化成软骨细胞,形成软骨小结,表达Ⅱ型胶原和X型胶原最后发生矿化,反映软骨发生过程。

    一、细胞简介
    平台编号:bio-105955
    拉丁属名:ATDC5(小鼠胚胎瘤细胞)
    细胞名称:小鼠胚胎瘤细胞
    规格:1ml/T25
    种属:小鼠细胞系/胚胎、胎盘和脐带
    到货周期:10-15个工作日
    细胞用途:仅供科研使用。
    注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用

    二、细胞特性
    1)来源:小鼠软骨
    2)形态:多角形,贴壁生长
    3)含量:>1x106 个/mL
    4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
    5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

    三、ATDC5细胞传代方法
    1、用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代;
    2、待细胞长满瓶底面积80%-90%,需要对其进行传代,第一次传代比例为1:2;
    3、传代步骤:将0.25%含EDTA胰酶置于37℃预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需时常取出置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间,记录最佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入1ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1200rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。
                         
    四、细胞培养步骤
    1、培养基及培养冻存条件准备:
    1)准备DMEM培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092),90%;胎牛血清,10%。
    2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
    3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
    2、细胞处理:
    1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
    2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
    3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

    对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
    1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
    2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
    3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
    4、将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

    五、细胞的运输和保存
    使用T25瓶充液发送活细胞。收到细胞后,请先在显微镜下检查细胞生长状态,并将T25瓶置于培养箱约6h或过夜后,再次检查细胞状态。若状态良好,可按照以下细胞培养步骤进行细胞后续处理操作。若发现可疑污染物,请及时与我们取得联系。

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