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    HGC-27/人胃癌细胞专用培养基的应用!


                                                             

    一、背景

    HGC-27细胞专用培养基适用于HGC-27细胞各个时期的无菌培养。HGC-27细胞专用培养基包含HGC-27细胞生长所需的各种物质,不需要额外添加血清和其他成分可直接用于HGC-27细胞的体外培养。HGC-27细胞系源自未分化胃癌病人的淋巴结,能分泌黏液素。

    临床上判断肿瘤的恶性程度是依据分化来讲的。高分化肿瘤,恶性程度低,预后较好;低分化肿瘤,恶性度高,预后较差;未分化肿瘤,恶性程度极高,预后最差。那么,癌症的高分化、中分化与低分化是怎么回事?所谓分化,简单地说就是瘤组织的成熟程度,恶性肿瘤或多或少都有向正常细胞分化的特点,瘤细胞分化越接近正常细胞,则越成熟,通常称为高分化,也称为Ⅰ级,如果瘤细胞分化太差,极不成熟,但仍保留某些来源组织的痕迹,则称为低分化,或称为Ⅲ级。界于两者之间的称为中分化,或称为Ⅱ级。但是,有时候肿瘤细胞分化太差,根本找不到来源组织的征象,则称为未分化。

    液体培养基保存:

    液体培养基应于4℃冰箱避光保存,实验前放入37℃预热。未加血清液体培养基有效期为12个月。液体培养基中的L-谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量L-谷氨酰胺。

    二、人胃癌细胞的应用

    用于LY294002对胃癌细胞HGC-27增殖和MMP-2、MMP-9表达的影响研究:

    通过PI3K特异性抑制剂LY294002作用于胃癌细胞HGC-27,抑制PI3K-Akt信号通路活化,探讨PI3K-Akt信号通路对胃癌细胞增殖和MMP-2、MMP-9表达的影响。

    方法:应用细胞培养技术培养HGC-27细胞,用不同浓度(0、10、20、40μM)的LY294002对细胞进行干预至不同的时间(20、40、60小时);CCK-8法检测细胞增殖;免疫细胞化学法检测p-Akt表达水平的改变;流式细胞仪(PI染色)检测细胞周期;半定量RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9 mRNA的表达情况。

    结果:LY294002作用于HGC-27细胞后:1.细胞增殖被抑制(P<0.05),并且在实验浓度和时间范围内,随着LY294002干预浓度(P<0.05)和干预时间(P<0.05)的延长,增殖抑制作用逐渐增强;2.p-Akt表达水平下降;3.细胞周期分析示S期细胞比率明显减少(P=0.008);4.MMP-9mRNA表达水平明显下降(P=0.000),而MMP-2mRNA表达水平未发生明显改变(P=0.118)。

    结论:1.LY294002作用于HGC-27细胞后,能够抑制PI3K-Akt通路活化;2.LY294002能够抑制HGC-27细胞增殖和细胞周期的进展;3.PI3K-Akt信号通路参与调控HGC-27细胞中MMP-9的表达,通过抑制该信号通路的活化,能够抑制MMP-9的表达。

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