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    BV2(小鼠小胶质细胞)操作流程与处理方法!


                                                                                                 

    一、细胞简介
    平台编号:bio-73434
    拉丁属名:BV2
    细胞名称:BV2(小鼠小胶质细胞)
    种属:小鼠
    年龄(性别):
    组织来源:
    生长特性:贴壁
    细胞形态:上皮细胞样
    背景描述:BV-2细胞是由E·Blasi建立于1990年;BV-2细胞由小鼠小神经胶质细胞经逆转录病毒介导转染v-raf/v-myc获永生化。BV-2细胞保留有小神经胶质细胞多种形态、表征和功能特征;免疫组化结果显示,BV-2细胞为MAC1、MAC2阳性;而MAC3、胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。
    细胞特性:BV2(小鼠小胶质细胞)“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细Chemicalbook胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%。接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力zui好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。
    生长培养基:MEM(货号:150410)+10% FBS(货号:164210-500)+1% P/S(货号:180120)
    培养条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃
    说明书下载:BV2.pdf

    二、操作流程

    1、您收到BV2小鼠小胶质细胞后,请按照以下方法进行操作:
    取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
     
    2、细胞传代:
    1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
    2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
    3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
    4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。

    3、细胞冻存:
    1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
    2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
    3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
    4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

    4、细胞复苏:
    1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
    2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
    3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
    4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。

    三、细胞处理方法:

    (一)贴壁细胞
    1、 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。
    2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
    3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。
    4、37度平衡1-2小时。
    5、用移液管吸取培养基,到50ml离心管中,剩下细胞密度达到80%至90%可以传代,如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。
    6、如果肉眼检查上清有细胞,对50ml上清进行离心收集细胞,如果细胞连片状态,弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化(1ml胰酶37度),接种培养。
     
    (二)悬浮细胞
    1、接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。
    2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
    3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。
    4、细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)。
    5、1000rpm,5min 离心,用吸管小心吸出上清,加入培养基,重悬细胞。
    6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种,加入新鲜培养基,置于 37℃,5%CO2 培养(大部分细胞)。

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