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    瓷珠菌种保存法的常见问题解答!


    1、菌种保存管能保存霉菌酵母菌吗?

    答:可以。对于霉菌等真菌需培养7 天进行保存,而酵母菌需培养三天将孢子洗脱下来进行保存,保存管中的小瓷珠可以作为介质来吸附孢子和菌丝,相当于砂土保存法中砂土作为载体起到的作用。

    2、所有的菌都能保存吗?如果不是的话,什么样的菌可以保存?什么样的菌不可以保存?

    答:可以。菌种保存的原理是预防或减缓DNA 复制时自发突变导致菌种退化,因此要创造代谢不活泼的状态,而菌种保存时使菌种进入休眠态(孢子、芽孢),并创造干燥、低温、缺氧、缺营养的环境,创造的环境越接近此状态,所保存的菌种的时间就越长,所以从原理上讲,所有菌种都可用这种方法保存, 但需要注意的是,苛刻菌(如流感嗜血杆菌、脑膜炎萘瑟氏菌)等特殊细菌保存时,需-80℃或更低温度保存,才可以做到更长期的保存。

    3、能用菌种保存管永久保存菌株吗?

    答:温度越低,保藏效果越好。从目前的试验数据及实际保存效果来看,-20℃可保存1-5 年,-80℃或液氮中可保存5-10 年,不同菌种及不同的保存温度保存时间会有所不同(例如:大肠、沙门等常规细菌-20℃我们目前可以保存到6年)。但需要注意的是所保存的菌种需每年抽检进行生化特征的鉴定,确定菌株无变异。

    4、菌种保藏时为什么要进行分离纯化?

    答:分离纯化后才能获得单一菌株,单一菌株进行菌种保藏才有意义,防止菌种交叉污染和变异,这也是菌种保存的基本原则。

    5、菌种保存管对于平板来说,对挑选菌落个数有要求吗?还是将整个平板的菌落全部刮入管中?

    答:对于要保存的细菌一般是要进行2-3 次的纯化,要保证一个平板上的菌是由单一菌落传代而来的,所以在细菌保存的过程中,为了保证制备的菌悬液可以达到3-4MCF,是可以将整个平板的的细菌全部刮到管中的,如果平板长的比较满一般半个平板就够用,具体用量也根据菌种的不同有所差异,如霉菌、酵母菌在保存时,不适合用浊度法。

    6、对于液体培养基培养的纯菌,是否也可以用咱们的菌种保存管?如果可以的话,怎么操作?

    答:是可以用的,如果液体培养基能保证是纯菌的话,可以直接离心,弃掉上清,然后把保存管中液体吸进去充分混匀,然后再转移到菌种保存管中,整个过程要注意无菌操作。不过,一般菌种保存管最好选择平板菌落进行保存,因为液体培养基中有杂菌是不易观察出来的。

    7、为什么在菌种保存时,要上下颠倒?为什么不能旋摇?

    答:上下颠倒,可使菌悬液充分混匀,菌株充分、均匀地吸附到小瓷珠上,旋摇不利于菌悬液充分混匀,反而会使菌株全部沉淀于管底。

    8、为什么在使用时要将管内的液体尽可能多的吸出?

    答:吸出液体可避免反复冻融形成的冰晶对菌株的损伤,加快复苏的过程,因此,要尽可能的将与菌种混匀后的保存液吸净。而常用的甘油法,在复苏的过程中需用水浴锅快速溶解,在此过程中,对菌株伤害较大。

    9、在使用后,菌种保存管的保存环境?需要-80℃冰箱吗?

    答:本公司菌种保存管采用的是低温冷冻保存法,因此,使用后,需放置低温环境,如-20℃、-80℃或液氮中保存,而且温度越低,保存效果越好。用户需根据菌种的保存要求选择具体保存温度。

    10、为什么说,如果有条件的话,菌种保存管最好置于-80冰箱或液氮中?

    答:因为,贮存在-70℃以下低温中能减少冰晶形成,可极大降低冰晶形成对细菌的伤害,同时可为被保存的菌种创造更低的代谢环境,从而延长细菌保存的时间。

    11、为什么在取用菌株时,操作过程要求快速?

    答:菌种保存复苏的原则,要求慢冻快融,之所以要求快速,是因为在菌种复苏的过程中, 长时间的溶解过程会对所保存的菌种造成损伤,而我们经过改良的保存方法最大程度的避免复苏所造成的影响,但我们还是建议遵循菌种的保存复苏原则,保证所复苏菌种的复苏率。

    12、将菌株反复冻存,到底对菌株有什么影响?

    答:低温会使菌株细胞内的水分形成冰晶,从而引起细胞结构尤其是细胞膜的损伤。细胞体积大者一般要比较小者对低温更为敏感,而无细胞壁者则比有细胞壁者敏感。如果放到低温(不是一般冰箱)进行冷冻时,会产生冰晶,冰晶呈针状,极易导致细菌的严重损伤。用电镜观察,可见细菌的核膜上有大量针尖样小孔,当从低温下移出并开始升温时,冰晶又会变大,故反复冻存,会对菌株造成极大损伤。

    13、为什么有时候菌种的保存效果不佳?

    答:1、可能是由于保存后未将保存液吸尽,反复冻融形成冰晶损伤菌株细胞,影响了菌株活性。

    2、确定所保存的菌种是否为对数生长期的菌种,我们建议普通菌种保存为18小时内的新鲜菌种,而霉菌需要待孢子出现后保存其孢子。

    14、该产品能否用于菌种的运送,如果可以在什么条件下运送?

    答:就目前试验数据而言,我们建议可主要用于普通细菌的短期运送,对于厌氧菌在运送时最好让其处于厌氧环境下,2-8℃运送不超过5 天。另外需要说明的是如弧菌属绿脓杆菌需要常温运送,其对2-8℃温度极其敏感。

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