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K-562(人慢性髓原白血病细胞)

小杨 / 2020-03-26

正文


细胞简介
平台编号:bio-73071
规格:1×10?cells/T25培养瓶
拉丁属名:K-562
细胞名称:K-562(人慢性髓原白血病细胞) 
种属:人 
年龄(性别):女;53岁 
组织来源:骨髓;慢性骨髓性白血病(CML) 
生长特性:悬浮 
细胞形态:淋巴细胞样 
背景描述:连续细胞株K-562是由Lozzio从一位临终的53岁女性慢性骨髓性白血病患者的胸水中建立。K-562细胞被归入高度未分化的粒性白细胞类,Erson等对其表面膜性质的研究表明,K-562细胞是一株人类红白血病细胞。K-562细胞在自然杀伤分析中广泛作为高敏感的体外受体,See Pross等将K-562细胞用于NK细胞的体外详细检测,包括NK细胞活性的数学量化。K-562母细胞是多能性造血恶性细胞,它能自发分化成可识别的红血球祖细胞、粒性白细胞、单核细胞等。K-562细胞是EBNA阴性的。 
生长培养基:IMDM(货号:PM150510)+10% FBS(货号:164210-500)+1% P/S(货号:PB180120) 
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃
说明书下载:K-562 [K562].pdf

K-562(人慢性髓原白血病细胞)细胞常规说明:
冻存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基础培养液
细胞质检情况:不含细菌、真菌、支原体等微生物污染
传代建议:1:2~1:3传代,2~3天换液1次
特别提醒:签收细胞后,如细胞状态不佳,或培养中遇到问题,烦请当天尽快联系,以便处理。当天及时反馈细胞情况和细胞照片是售后跟踪处理重要的参考依据,请务必重视。

K-562(人慢性髓原白血病细胞)细胞复苏
1、把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2、把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
3、把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。
4、标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。
5、3天换一次培养基。

培养基: D-MEM/F-12培养基(GIBCO,货号12400024,添加L-glutamine 150mg/L, NaHCO3 1.5g/L),90%;0.3mg/ml G418;优质胎牛血清,10%。 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:33.5摄氏度。
生长特性: 贴壁生长

K-562(人慢性髓原白血病细胞)在进行细胞传代培养的时候,胰蛋白酶作用的时间是在1~3分钟,由于我有好几个培养瓶(4个以上)的细胞都需要进行传代操作,那么就胰酶消化这一步而言,我是该一个培养瓶一个培养瓶这么分开做,还是可以几个同时做呢?同时做我怕后来操作的培养瓶中的细胞消化过度啊!一个一个的做会不会又太费时呢?
1、一个一个做!防止污染,和消化细胞时间的不均匀。
2、原则上,为了避免细胞系之间的污染,应该一个一个的做。但是如果你能保证无菌操作的原则,K-562(人慢性髓原白血病细胞)也能把握好各种贴壁细胞系消化的时间,是可以同时做,这样效率高。建议你刚开始一个一个的做,熟练以后根据具体情况决定如何做。
3、4个可以同时做,时间到了用移液枪给4个瓶加含血清的培养基终止就行。
4、新手的话强烈建议一个一个处理细胞,特别是消化,除非你养的细胞对消化都不敏感,不然很容易消化过度或者不到位。另外同时处理多个细胞容易出现细胞间交叉污染,一旦污染基本没救,比细菌污染还要麻烦。
5、刚开始还是一个一个来,K-562(人慢性髓原白血病细胞)消化的时间与细胞的来源有很大关系,贴壁性强的细胞,需要消化的时间较长。一般除了贴壁性强的癌细胞外,细胞消化时间1-3min,还有胰蛋白酶的浓度有关系,浓度高的消化时间要短一些,不然会消化过了,对于细胞的生长不好。你可以在分散打入胰蛋白酶时,轻晃培养瓶,在显微镜下看见细胞开始变亮,皱缩,卷边的时候就加入培养液或者血清终止消化。

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