一级菌种转管的注意事项
①接种前要准备好一些无菌棉塞，一起放入无菌室内，以便在所用棉塞受潮时更换。
②接种时切勿使试管口、瓶口或培养皿开缝处离开酒精灯火焰的无菌区。
③操作时试管口、瓶口一般不向上，以减少杂菌污染机会。
④接种时，操作人员尽量少走动，以减少空气流动扬起的灰尘污染。
⑤接种时留下的污物，如用过的酒精棉、火柴梗等要及时清除，以免引起污染。
⑥如一次接种不同菌种时，要注意做好标记，以免搞混。
一级菌种的培养
(1)菌丝培养 斜面接种后，应立即置于适温下培养。当种块上的菌丝萌发并向培养基上蔓延后，可将培养温度降低2～3℃，菌丝生长速度虽然略微减慢，但生长更加健壮。气生菌丝发达的菌种，如蘑菇的气生型菌种，还要采取逐步降温法进行培养。双孢蘑菇接种后，将菌种置于20～22℃条件下培养7～8d后，当菌落长到蚕豆粒大时，将培养温度下降到15℃左右；菌丝长到试管斜面1/2以上时，再移入12℃左右的温度下培养，至长满斜面。
(2)温度适宜母种培养过程中，若温度过高，则菌丝衰老快，易倒伏发黄。同时，还要防止温度波动过大，在温差过大的情况下，试管内壁凝成水珠滴下，水滴接触的菌丝便会倒伏、发黄。因此母种保温培养时，保温的热源一定要均衡、稳定。在自然气温较低时，为防止打开培养箱温度急剧下降，试管内壁出现冷凝水，可用纱布做成棉垫，将试管包在棉垫内培养，或将试管分别装入铝质饭盒内，用棉垫盖好，也可防止热量过快散发。
(3)防止母种老化平菇、蘑菇（气生型）母种培养过程中，在种块附近往往会出现一个菌丝塌陷区，特别是蘑菇菌种，沿着塌陷区还会出现倒伏、发黄现象。其原因与移植时琼脂块过厚、培养温度过高有关。在种块过厚、温度过高时，种块上菌丝很快向四周蔓延生长，然后才能向培养基内定置。其中部菌种老化快，不易做母种使用。
(4)注意通风母种培养期间，通风不良、氧气不足，菌丝容易衰老、发黄。因此，大量的母种不易放在通风不良的恒温箱内培养，应放在通风较好的恒温室内培养。如果没有恒温室，放在恒温箱内的菌种也不能过分拥挤。
(5)斜面放置接种后的斜面，在恒温箱或恒温室内培养时，应垂直放在栅板或菌种架上，以免培养过程中凝结的水汽溢流到斜面上。必须平放时，也应该将管口前段稍微垫高，或将试管放在垫有棉垫的浅盘内，并使斜面向下。培养皿培养期间，应将皿底向上。
(6)防止杂菌污染在正常情况下，斜面接种后，即以种块为生长中心向四周呈辐射状蔓延。金针菇的菌丝前端可形成粉孢子，老熟的猴头菌丝会断裂，银耳芽孢能产生掷孢子，因此在斜面上除菌块萌发菌丝外，还会出现一些分散性的小菌落。其他菌种出现类似分散性小菌落，便要认真对待，如果是霉菌菌落，5～10d后便会形成色彩鲜明的分生孢子，应予淘汰；若在种块的一侧或其周围出现黏稠状物，大都是由母种不纯造成的细菌污染；斜面上出现分散性细菌菌落，则与灭菌不彻底或无菌操作不严有关。细菌菌落向四周扩散速度比食用菌菌丝生长速度要慢，很容易被生长中的菌丝覆盖。因此，在接种后的前几天要逐管检查，防止掺人杂菌，确保母种纯度。
灵芝、树舌等菌种，表面气生菌丝易革质化，为延缓老化，最好用黑纸包裹试管培养。
在高温梅雨季节，利用自然温度培养母种，在通风不良的情况下，棉塞上很容易生长霉菌，应采取以下防霉措施：用95%的乙醇95mL，加入甘油5mL，升汞0.5g，另加龙胆紫、美蓝（亚甲蓝）、中性红少许做指示剂。取下棉塞，蘸取少量防霉剂，再塞到试管口内，慎勿接触培养物。也可在乙醇挥发后再接种，此法也有防螨作用。还有一种更简单的方法是用玻璃纸或锡箔纸包裹试管或管口，并能防止水分蒸发。
(7) -级菌种的保藏一级菌种尚未全部长满之前，就应及时移入1～4℃温度下保存。保存的母种要贴上标签，或用特种铅笔、油质记号笔在试管上做好标记。
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