实验原理
感受态是指受体细胞最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。感受态由受体细胞的遗传性状所决定的，受菌龄、外界环境因子的影响。cAMP可提高感受态水平一万倍，而Ca2+存在也可大大促进转化的作用。新鲜，幼嫩的细胞是选择做感受态细胞的材料。
感受态细胞在0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，而转化混合物中的DNA形成抗DNase（DNA酶）的羟基--钙磷酸复合物，并粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，可促使细胞迅速收缩，吸收DNA复合物，完成转化。
实验材料
大肠杆菌DH5α菌株，LB固体培养基，LB培养液，0.1M CaCl2溶液，20%无菌甘油。
恒温培养箱，冷冻离心机，无菌工作台
实验过程
1、从-20℃冰箱中取出保种的DH5α菌株，用灭菌的枪头挑取少量保菌液，在LB固体培养基上划线处理，并与37℃培养箱中过夜培养。
2、第二天，从LB固体培养基上挑取湿润，圆滑的单菌落，放入到LB培养液中，37℃过夜培养（约16h）。
3、将该菌液按照1:100～1:50的比例，转接于新鲜的100ml LB液体培养基中，37℃振荡扩大培养，当培养液开始出现混浊后，每隔20～30min测一次OD600，当OD600值为0.3-0.5时停止培养；
4、将菌液转移到冰上预冷的离心管中，冰浴30min，在4℃条件下，4000r／min离心10min。
5、弃掉上清液，用1ml预冷的 CaCl2溶液轻轻悬浮细胞，4℃条件下，4000r／min离心10min。
6、重复步骤4一次。
7、弃去上清液，加入100μl预冷的CaCl2溶液，小心悬浮细胞，即制成了感受态细胞悬液。
8、制备好的感受态细胞悬液可直接用于转化实验，也可加入等体积的20%甘油（已灭菌处理）混匀后分装于1.5ml离心管中，置于-70℃条件保存。
注意事项
1、为制备转化效率较高的感受态细胞，可将保种液经划线和二次培养以后用于制作感受态细胞。
2、注意挑取LB固体培养基上湿润，圆滑的克隆，以防挑取杂菌。
3、进行二次培养的时候，摇床转速应选择较低转速，空载转速在100-150转/min左右。
4、制作感受态的过程中尽量冰上操作，操作的动作尽量轻柔，稳健；试验中所用的试剂，转子，离心机需要提前预冷。
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