胶孢炭疽菌的特点与优势及微生物培养方法！
小杨 / 2024-04-15 09:07:28
胶孢炭疽菌为炭疽菌属的一种。引起植株炭疽病。病害症状主要为害叶片。多从叶尖、叶缘发病，或于叶片表面着生近圆形的病斑。病斑圆形或不规则形，边缘黑褐色，内部凹陷，灰褐色或灰黑色；后期着生小黑点，病健交界明显。
一、菌种简介
提供形式：斜面培养物
英文名称：Colletotrichum gloeosporioides Penz.
属名：Colletotrichum
种名加词：gloeosporioides Penz.
来源历史：←中国农业科学院农业资源与农业区划研究所←中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
收藏时间：2007-12-31
原始编号：CATAS EPPI2061, Z20070061
原产国：中国 CN
资源归类编码：15151911101
模式菌株：非模式菌株
主要用途：a:4:{i:0;s:4:分类;i:1;s:4:研究;i:2;s:4:教学;i:3;s:4:生产;}
特征特性：菌丝初期无色，后期变为浅褐色。圆筒形，有隔膜和分枝，直径2～7um。在培养基中产生黑色素。分生孢子盘多在叶面散生或不规则排列，浅褐色，圆形或卵圆形，扁平或隆起，直径100～250um。分生孢子盘内密生短小的分生孢子梗，梗上有分生孢子。孢盘上有时长有硬而长、直或弯的深褐色刚毛。刚毛有1～2个隔膜，大小为500～1000um×4～7um；有时缺少这种刚毛。分生孢子单胞，无色，椭圆形或圆筒形，有油点或无；孢子大小因培养基种类或寄生部位不同而有差异，一般大小为12.2～15.8um×4.0～5.4um。叶片受害后，多在叶尖或叶缘出现，初为水渍状褐色的小斑，后向下，向内扩展成椭圆形或梭形至不规则形褐斑，斑面有明显或不明显的云纹。数个病斑连合成斑块，叶片变褐干枯。潮湿时斑面出现小黑点，即病菌分生孢子盘。
具体用途：教学科研，分类
生物危害程度：四类
致病对象：植物
致病名称：闭鞘姜炭疽病
传播途径：以菌丝体和分孢盘在病部或随病残体遗落在土中越冬。以分生孢子作为初侵与再侵接种体，借助雨水溅射等传播，从伤口或孔口侵入致病。在南方特别是在广东，病菌可在田间多种寄主作物间辗转传播危害，并无明显越冬期。
分离基物：闭鞘姜叶片
采集地：海南省儋州市
培养基编号1：0014
培养温度：N19.30′
资源保藏类型：a:1:{i:0;s:6:培养物;}
保存方法：a:3:{i:0;s:15:-80℃冰箱冻结法;i:1;s:8:矿物油法;i:2;s:4:其他;}
共享方式：a:1:{i:0;s:10:公益性共享;}
用途：教学科研，分类
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、产品特点
1、菌种功能明确、品种稳定、应用；
2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压；
3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境；
4、复活迅速,可在短期内成为优势种群；
5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境；
6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。
三、产品优势
1、产品质量稳定,是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。
2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。
3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。
4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。
四、微生物菌种的培养
1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。
2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。
4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。
5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。
五、实验内容
1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
六、保藏方法
1、传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。
2、液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。
3、载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5、冷冻保藏法
可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。
6、冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
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