枯草芽孢杆菌

安瓿瓶冻干管打管说明
 
一、打管说明
1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。
2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。
3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长。
4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。
5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。
特别注意事项
l、微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方,室温放置时问过长会导致菌种衰退;
2、菌种操作应在无菌条件下进行,防止杂菌污染:
3、斜面菌种保藏时间通常为1-2个月,应根据菌种状况及时转接;冻干菌种保藏时间通常为5~10年;
4、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时与中国微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。

  西林瓶和甘油冻存管打管说明
 
二、西林瓶菌种打管复活操作步骤
1、用 75%酒精棉擦拭西林瓶表面进行消毒。 
2、在生物安全柜中打开铝制瓶盖和胶盖。 
3、用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基（《菌种说明书》中固体培养基去掉琼脂即可)于西 林瓶中将冻干菌粉全部溶解。 
4、将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中的 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。
5、将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养，以液体培养结果为准。
三、甘油冻存管菌种打管复活操作步骤 
1、准备好推荐的菌种培养基（见《菌种说明书》）。
2、将冻存管下半部浸入 37℃温水中轻轻摇动，使冷冻状态的菌种悬液迅速融化。如果收到菌 种冻存管时菌悬液是融化状态则需要立即进行转接培养。 3、用 75%酒精棉擦拭冻存管表面进行消毒。
4、在生物安全柜中打开冻存管瓶盖，用无菌吸管吸取全部菌悬液，均匀涂布到 2 支试管斜面 或平板上。 
5、将斜面试管或平板于推荐条件下静置培养。对于生长缓慢的菌种应持续培养 2 周至更长的 时间。
四、注意事项 
1、 所有打管操作都需要无菌操作。需由专业微生物技术人员在相应防护设备中进行，生物危 害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作。 
2、 西林瓶和冻存管打开后需一次用完，不能留存。 
3、 菌种经过冻干保藏后，处于休眠状态，需要转接 2-3 代恢复活力。
4、 大部分冻干菌种会在培养几天后生长。有些菌种第一代恢复生长时会有较长的延迟期，培养此类菌种时需要将培养时间延长至正常培养时间的双倍时长，甚至 2 周至更长的时间。